吡咯喹啉醌(pyrroloquinolinequinone,法测PQQ)是定吡的含一种不同于烟酰胺核苷酸(NAD+和NADP+)和黄素核苷酸(FAD和FMN)的新有机辅酶,上世纪60年代在研究非磷酸化细菌的咯喹咯喹葡萄糖代谢过程中被首次发现。从微生物到人体组织,啉醌啉I量PQQ在自然界的咪唑分布范围极广。动物和人类通过饮食途径获取PQQ以满足机体需要。并吡PQQ具有极其独特的法测理化性质,其促生长、定吡的含抗应激和在动植物发育繁殖方面的咯喹咯喹营养作用越来越受到重视。目前对于PQQ主成分的啉醌啉I量含量测定方法较多,但测定PQQ中杂质的咪唑方法鲜有报道,本文通过实验研究建立了HPLC法测定PQQ中咪唑并吡咯喹啉(IPQ)杂质含量的并吡方法。
一、法测材料与方法
1、定吡的含仪器与材料
Agilent1260型高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司);METTLER-TOLEDOXS205DU型电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);乙腈(上海星可高纯试剂有限公司);磷酸氢二钾(国药集团化学试剂有限公司);四丁基溴化铵(阿拉丁);磷酸(ScharlabS.L);PQQ及IPQ对照品为自制;PQQ样品为自制(批号为17901、咯喹咯喹17902、17903)。
2、色谱条件
TCIKaseisorbLCODS2000色谱柱(4.6mm×150mm,5lxm);流动相为乙腈-缓冲溶液(配制10mmol的磷酸氢二钾和15mmol的四丁基溴化铵水溶液,用磷酸调节pH至7.4)[28:72];紫外检测器,检测波长为259nm;流速为1.0mL/min;进样量为20μL。
3、溶液配制
对照品溶液:精密称取PQQ对照品适量,用稀释剂(乙腈-水=[1:3])定量稀释制成每lmL中约PQQ 0.1μg的溶液。供试品溶液:精密称取PQQ样品适量,用稀释剂定量稀释制成每lmL中约PQQ 0.1mg的溶液。
4、检测方法
取对照品溶液与供试品溶液各20μL,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积按外标法计算供试品中IPQ的含量。
二、结果与讨论
1、专属性试验
取空白溶液、对照品溶液和混合溶液进样并记录色谱图,并用tPQ对照品溶液进行定位;确定出峰顺序与分离度,PQQ于IPQ之间的分离度为3.1,大于1.5,空白溶液无干扰。空白溶液图谱见图1,对照品溶液图谱见图2,混合溶液图谱见图3。
2、检测灵敏度试验
精密称取IPQ对照品适量,用稀释剂溶解并逐级定量稀释,测试IPQ峰的信噪比,确定检测限和定量限,试验结果见表1,检测限图谱见图4,定量限图谱见图5。拟定PQQ中IPQ的限度为不大于0.1%,本文综合检测限与定量限的结果选择0.05%为报告水平。
3、精密度试验
0.10%和0.15%水平加入IPQ,每个浓度依法平取同一对照品溶液,连续进样6次,记录色谱图,结果对照品溶液种主峰面积的RSD为1.4%,表明仪器精密度良好。取同一批样品,依法平行操作制备6份供试品溶液,分别测定,结果均未检出IeQ。取同一批样品,分别在0.05%、0.10%和0.15%水平加入IPQ,每个浓度依法平行操作制备3份加标溶液,分别测定,结果9份加样回收率的RSD为3.2%,表明方法重复性良好。不同分析员使用不同的仪器对同一批样品进行测定,结果一致,表明方法中间精密度良好。
4、标准曲线的绘制和线性关系的考察
配制IPQ浓度分别为0.05、0.08、0.1、0.15、0.2μg/mL的溶液,分别进样并记录色谱图,以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标进行线性回归,计算线性方程和相关系数,得到线性方程为Y=77.7168X+0.042976,线性相关系数为0.99976,结果表明IPQ在线性范围内与峰面积呈良好的线性关系。
5、加样回收率试验
分别在供试品中加入规定浓度的0.05%、0.10%和0.15%水平的IPQ,依法处理并测定,计算加样回收率,结果见表2。结果表明该方法具有较好的准确度。
6、溶液稳定性试验
配制对照品溶液和供试品溶液,分别室温放置12h、24h、36h后进样检测,放置后与0h检测结果相比,对照品溶液PQQ峰面积变化均不大于4.0%,供试品溶液测定结果一致,表明溶液在36h内稳定。
7、耐用性试验
分别改变测试条件,如改变流动相中有机相的比例、流动相中缓冲溶液的pH、柱温及流速,依法测定,结果与标准条件下测定结果一致,表明本方法具有良好的耐用性。
8、样品含量测定
取PQQ样品,依法测定,结果均未检出IPQ,表明产品均符合拟定质量指标要求,具体见表3。
在方法建立过程中,考虑到IPQ杂质相对于PQQ产品的制备成本会高很多,对IPQ相对于PQQ的相对响应因子(RRF)进行了测试,结果为1.089,介于0.9~1.1之间,因此采用PQQ作为外标法计算的对照品,大大减少了IPQ杂质对照品的用量。
三、结论
方法学验证表明,建立的HPLC法测定PQQ中IPQ含量的方法,具有良好的专属性、检测灵敏度、精密度、线性和准确度,方法较为简便,准确可靠,能够比较好地控制产品质量,易于推广应用,适用于PQQ中IPQ的质量控制。
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元气满满使用超声波振动筛对玻璃微珠进行精细筛分,行业资讯胶体粒子与蛋白质相互作用及其应用(三)怀孕8个月胎儿b超图增强质量意识 推进高质量发展豆豆衣橱2025新品 简约休闲 轻盈入春三个月的宝宝不吃奶瓶怎么办?教你正确哄宝宝喝奶的方法水中碘离子溶液标准物质:碘含量测定的校准标杆,保障分析准确性黑龙江哈尔滨:开展质量认证系列宣传体验周活动吉林镇赉:开展特种设备安全监督抽查怎样把玻璃加工成镜子 什么是玻璃镜,行业资讯辽宁:“你点我检”服务惠民生走进乡村大集北京石景山:开展茶叶过度包装执法检查生产玻璃材料的主要过程 玻璃生产主要原料的成分,行业资讯波兰制订膳食补充剂中硒和钼的每日最大摄入限量什么是隔热玻璃 中空玻璃隔热效果好吗,行业资讯“铁拳”行动∣湖北曝光6起典型案例彩晶玻璃生产流程 玻璃花怎样做,行业资讯胎儿会不会随着母亲熬夜影响健康?玻璃都有哪些检测项目 怎么样鉴定安全玻璃,行业资讯胎儿胎教音乐(如何选择适合胎儿听的音乐)江西省市场监管局联手京东集团共创放心消费环境tft玻璃和浮法玻璃有什么区别 何为TFT玻璃,行业资讯广西南宁开展校园食品安全专项检查什么是中空铝条 中空玻璃的特点,行业资讯北京丰台:开展双节前食品安全专项检查市场监管行风建设在行动|湖北:冷藏冷冻食品专项检查取得成效浙江杭州开展企业信用修复“一件事”改革苯中二硫化碳溶液标准物质:高精度校准,化工分析必备北京首家批发市场完成“生鲜灯”改造重庆、成都市场监管部门联手助推成渝地区双城经济圈建设豫南检测中心顺利通过环境检测扩项评审除雾的好方法 玻璃防雾剂有效吗,行业资讯聚焦茶叶过度包装|四川1715家茶叶企业承诺“不打擦边球”“铁拳”行动|宁夏石嘴山:出“重拳”查办民生领域违法案件243件生产、销售不合格产品 法国鳄鱼被处罚七彩芽 清爽明媚 清新治愈春日美好黑龙江哈尔滨:发布全省首个网络交易监测地方标准3d玻璃打印机多少钱一台 什么是2.5D弧面玻璃,行业资讯湖北武汉开展限制商品过度包装宣传活动手机曲面玻璃屏热弯技术 玻璃原材料有哪些,行业资讯秘鲁制订加工大米质量技术标准玻璃马赛克的特点与种类 玻璃马赛克拼贴施工流程,行业资讯无锡移动:深入开展“心级服务入网格”主题活动钢化玻璃应用范围有多广 诱发钢化玻璃爆开的因素,行业资讯厨房墙用玻璃好不好 公开式厨房墙面用烤漆玻璃合适吗,行业资讯一批刷单炒信、虚假广告典型案件被查办叮当猫:童装及儿童用品领域的先驱玻璃幕墙的光反射能否造成光污染 玻璃幕墙性能要求,行业资讯婴芬特EVFN 用心呵护 从“足”开始高效液相色谱荧光法测定血液透析器中双酚A溶出量(二)叮当猫IP形象迭代升级 多元化应用引航儿童产业全国试管婴儿医院排行榜,哪家最好?“铁拳”行动 |福建莆田3家企业“一品一码”未录入登记被警告浙江个体经济高质量发展大会召开如何利用网上医生在线咨询解决健康问题婴儿抗过敏奶粉推荐(选择适合宝宝的优质奶粉)腾势Z9GT宣布OTA升级,推出易三方水平车位泊车等六大功能玻璃瓶子怎么消毒 玻璃瓶应该怎么回收利用,行业资讯黑龙江鸡西:推进“在线消费纠纷解决”机制建设第七届中国创新创业大赛先进制造行业半决赛昨日举行,行业会议孕早期孕酮水平正常范围介绍啄木鸟 用休闲和清爽解锁孩子们内心的阳光密码北京石景山:开展月饼过度包装专项检查北京门头沟:开展汛期灾后食品安全隐患大排查行动孕前高蛋白饮食注意事项钡元素溶液标准物质:精准测定钡含量河北邯郸:持续推进农村食品安全治理玻璃卡纸是如何生产的 玻璃卡纸质量如何,行业资讯怀孕天数计算公式,如何准确计算怀孕周期福建:多措并举护航“开学季”高效液相色谱荧光法测定血液透析器中双酚A溶出量(一)玻璃的制造工艺是什么 玻璃器皿的生产工艺,行业资讯婴儿生长发育全过程详解安徽省公开征集粮食购销领域违法行为线索疱疹和上火水泡的区别大介绍(含图片对比)中国食药促进会消毒专业委员会组织的七项团体标准技术审查会顺利召开浙江省妇保医院地址及交通路线详解浙江鄞州开学第一课:迎亚运“童”心协力促维权淀粉指示剂:实验室通用指示剂,化学反应可视化神器酸性电解水结合复合膜对橘柚保鲜效果的研究(三)中国中小商业企业协会关于《β福建三明:餐饮和住宿服务类投诉量同比增长较快黑龙江佳木斯市消保中心提示:谨防掉入“校园贷”陷阱孕前饮食减肥操推荐吗女河北省市场监管局提示:洪涝灾害后要谨慎使用电梯等特种设备玻璃钢化炉放片段组成!,经验交流着力营造优质消费环境 广州启动“正品正货在市场”活动胎位不正是什么原因(胎儿位置异常的原因及处理方法)玻璃货物短线偏弱,行业资讯聚焦茶叶过度包装|广西南宁:开展执法检查 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